2020-04 08

04:46:29

试验九噬菌体效价的测定(张理珉)重点剖析.ppt

  3、试验道理 一个噬菌体→侵染宿主细胞→惹起裂解→分散重复侵染裂解→构成一个噬菌斑(琼脂凝胶中) 宿主细胞数远远大年夜于噬菌体数? 噬菌体效价(pfu/ml)= 噬菌斑数×10×稀释倍数 4、试验步调 1、制备底层平板 将已灭菌消融的牛肉膏蛋白胨固体培养基平板6个(倒薄一些),凝集。 2、参与大年夜肠杆菌敏感菌 在每个牛肉膏蛋白胨固体培养基平板上,无菌条件下,各皿参与敏感菌菌悬液0.9mL。 3、稀释噬菌体 取1mL含噬菌体液参与到 9mL牛肉膏蛋白胨培养液中,采取10倍稀释法,辨别制备噬菌体稀释液(10-7、 10-8 、 10-9 )。 4、噬菌体与大年夜肠杆菌敏感菌混淆 将已加有大年夜肠杆菌敏感菌6皿平板( 10-7 、 10-8 、 10-9各2皿)中,辨别参与0.1mL噬菌体稀释液,混淆后放置5分钟。 5、参与下层培养基 将5mL熔解的半固体培养基中敏捷倒入含噬菌体与大年夜肠杆菌敏感菌平板中(45~50℃),并混淆平均。活动凝集。 6、培养 37℃培养5小时或室温培养12小时。 7、不美观察、计数 不美观察平板中的噬菌斑,将每稀释度的噬菌斑构成单位(pfu)记录于表格内。 8、计算噬菌体的效价 依照六个计数准绳选择,计算每毫升未稀释的原液的噬菌体效价。 噬菌体效价(pfu/ml)= 噬菌斑数×10× 稀释倍数 试验步调框图(教员停止演示操作) 用牛肉膏蛋白胨固体培养基倒平板6皿(薄一点) 噬菌体稀释液(10-7、10-8、10-9)0.1mL,各2皿 敏感菌菌悬液0.9mL 放入已有底层固体培养基的平板中 混匀放置5分钟 将5mL熔解的半固体培养基中倒入上述平板中(45~50℃) 混匀(举措?) 37℃培养4小时或室温培养12小时 不美观察结果计数 ① ② ③ ④ ⑤ ⑧ ⑦ ⑥ 教科书引见方法的操作步调 噬菌体稀释液0.1ml 宿主培养液0.9ml 45~48℃熔解好牛肉膏蛋白胨半固体培养基4ml 混匀吸附5min 搓动混匀后倒于有底层的平板中 铺平 37 ℃培养5~6小时,不美观察计数 在无菌空试管中混匀下层后(3种成分),再倒入底层 上铺平。 思考题 噬菌体稀释度 10-7 10-8 10-9 1 2 3 平均 1 2 3 平均 1 2 3 平均 pfu数/平板 每毫升中的pfu数 1、记录结果,并停止统计剖析。 2、甚么要素决定噬菌斑的大年夜小? 3、假设在你的测定平板上,偶然出现其他细菌的菌落,可否影响你的噬菌体效价测定? 4、噬菌体效价测定试验中所用操作方法和书上引见的操作方法比拟有甚么优缺点? 下周试验内容 微生物(细菌)的罕见心理生化反应 要点: 1、控制停止微生物大年夜分子水解试验的道理和方法。 2、了解糖发酵的道理和在细菌判定中的主要感化。 3、控制经过糖发酵(葡萄糖、蔗糖、乳糖)辨别分歧微生物的方法。 4、了解IMViC(吲哚、甲基红、伏-普、柠檬酸)与硫化氢反应的道理及其在肠道菌判定中的意义和方法。 实 验 九 噬菌体效价的测定 目标请求 1、控制噬菌体效价测定的道理及方法 2、不美观察噬菌斑的形状 实 验 内 容 一 培养基和试验物品的准备 本次试验准备任务(2人/组) 1、配制牛肉膏蛋白胨液体培养液( pH 7.4-7.6 ); (已准备好)。 2、测定效价时稀释用9ml牛肉膏蛋白胨液体培养液—— 3支/组,分装于18×180mm试管; 3、牛肉膏蛋白胨固体培养基(1.5%的琼脂)——底层用,100ml/组,装于250ml三角瓶, (用于制备6个无菌平板,倒薄一点) 4、下层用5ml牛肉膏蛋白胨半固体培养基(0.8 %的琼脂),消融后分装于15×150mm试管中加塞包扎灭菌,6支/组; (教员已准备好) 5、1ml无菌吸管 5支/组。 实 验 内 容 二 噬菌体常识引见 1、几个主要概念 1、噬菌体: 是感染细菌、真菌、放线菌或螺旋体等微生物的病毒,散布极广,集体很小,在光学显微镜下看不见,需用电镜不美观察。 分歧的噬菌体在电镜下有三种形状:蝌蚪形、微球形和丝形。大年夜少数噬菌体呈蝌蚪形,由头部和尾部两局部构成。 2、噬菌斑: 在混浊的细菌菌面(菌苔)上构成的透明区域,是由噬菌体不时侵染宿主细胞裂解构成的,其外形、大年夜小不等。 3、噬菌体效价: 指1mL样品中所含具有侵染活性的噬菌体(烈性噬菌体)数量——噬菌斑构成单位(pfu,plaque-forming unit)。 效价(titre,titer)这一名词在分歧的场合有其分歧的含义(如抗生素等)。 2、病毒粒子的结构(模型) 噬菌

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